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線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明！

產(chǎn)品說(shuō)明：

復(fù)合體Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又稱 NADH-CoQ 還原酶或 NADH 脫氫酶，廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，是線粒體內(nèi)膜中zui大的蛋白復(fù)合物。該酶催化一對(duì)電子從 NADH 傳遞給 CoQ，同時(shí)可使 O2還原生成 O2-，是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生 O2-的主要部位。測(cè)定該酶活性，

不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈（ETC）狀態(tài)，而且可以反映活性氧（ROS）生成狀態(tài)。復(fù)合體Ⅰ能夠催化 NADH 脫氫生成 NAD+，在 340nm 下測(cè)定 NADH 的氧化速率計(jì)算出該酶活性的大小。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽/勻漿器、丙酮、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、復(fù)合體的提?。?

(1) 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬(wàn)細(xì)胞，加入 1.0 mL 提取液，用勻漿器或研缽于冰上勻漿。

(2) 4 ℃ 600 g 離心 10min。

(3) 將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000 g 離心 15min。

(4) 上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅰ（此步可選做，可以判斷線粒體提取效果）。

(5) 在沉淀中加入 400µL 提取液，超聲波破碎（功率 20％，超聲 5 秒，間隔 10 秒，重復(fù) 15 次），用于復(fù)合體Ⅰ酶活性測(cè)定，并且用于蛋白含量測(cè)定。

線粒體呼吸鏈主要由線粒體呼吸鏈酶組成，線粒體呼吸鏈酶復(fù)合物缺陷是導(dǎo)致線粒體病的重要原因（約有30%-40%的線粒體疾病是由于線粒體呼吸鏈酶缺陷造成），線粒體病種類較多，通常采用線粒體基因組分析與線粒體呼吸鏈酶活性檢測(cè)的方式加以確診。
 

呼吸鏈的四種復(fù)合體可受不同抑制劑的影響阻斷其電子傳遞過(guò)程。其中異戊作用于復(fù)合體Ⅰ；萎銹靈作用于復(fù)合體Ⅱ；抗mei素A作用于復(fù)合體Ⅲ；CN﹣?zhàn)饔糜趶?fù)合物Ⅳ中的氧化型Cyt a3，CO作用于還原型Cyt a3。以上抑制劑可阻斷呼吸鏈的電子傳遞，引起機(jī)體迅速死亡。

線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明！