尼羅紅的使用說(shuō)明！
尼羅紅是一種親脂性的惡嗪類(lèi)熒光染料，對(duì)光敏感，與脂類(lèi)物質(zhì)結(jié)合并發(fā)出熒光，在激發(fā)波長(zhǎng)530nm激發(fā)下，顯示強(qiáng)烈桔紅色熒光。同時(shí)在紫外光的照射下顯示紅色。另外，也可用于蛋白質(zhì)染色。
產(chǎn)品名稱(chēng)：尼羅紅
英文名稱(chēng)：9-(diethylamino)benzo[a]phenoxazin-5(5H)-one
分子式：C20H18N2O2
分子量：318.37
產(chǎn)品規(guī)格：100mg
純度：≥95%
外觀：墨綠色粉末
溶解性：1mg/mL in EtOH
熒光光譜Ex/Em：530nm/635nm
保存條件：RT，避光，有效期3年
產(chǎn)品說(shuō)明：
一、工作液制備
1）母液準(zhǔn)備：取適量的尼羅紅用無(wú)水 DMSO 充分溶解制備 1mM 儲(chǔ)存液，按照單次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，避光保存。
2）工作液準(zhǔn)備：用 HHBS 或生理緩沖液，pH 7將母液按 1:1000 稀釋為1×尼羅紅工作液，漩渦混勻。
【注】：尼羅紅的實(shí)際染色濃度請(qǐng)參考文獻(xiàn)或?qū)嶒?yàn)室體系來(lái)調(diào)整。
二、染色步驟
1）用檢測(cè)化合物處理細(xì)胞一段時(shí)間；
2）離心并調(diào)整細(xì)胞濃度為 1-5×105cell/管；
3）用 500µl 尼羅紅工作液重懸細(xì)胞；
4）室溫或 37oC避光孵育 5-10min；
5）吸掉染色工作液，用 HHBS 或適當(dāng)緩沖液清洗細(xì)胞；
6）用500µl 預(yù)熱的 HHBS 或培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，使細(xì)胞密度為 1-5×105cell/管；
7）熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光信號(hào)，Ex/Em = 552/636 nm；
【注】
●對(duì)于貼壁細(xì)胞，可用 HHBS 或適當(dāng)緩沖液清洗細(xì)胞，然后直接加入尼羅紅工作液孵育。
●細(xì)胞也可預(yù)固定，然后用尼羅紅工作液染色。
注意事項(xiàng):
1）本品僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其它用途。
2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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