明膠酶譜法分析試劑盒再次獲得山東大學(xué)齊魯醫(yī)院老師訂購!
簡介:
山東大學(xué)是中國近代高等教育的起源性大學(xué)。其主體是1901年創(chuàng)辦的山東大學(xué)堂,是繼京師大學(xué)堂之后中國創(chuàng)辦的第二所國立大學(xué),也是中國所按章程辦學(xué)的大學(xué);其醫(yī)學(xué)學(xué)科起源于1864年,開啟近代中國高等醫(yī)學(xué)教育之先河。從誕生起,學(xué)校先后歷經(jīng)了山東大學(xué)堂、國立青島大學(xué)、國立山東大學(xué)、山東大學(xué)以及由原山東大學(xué)、山東醫(yī)科大學(xué)、山東工業(yè)大學(xué)三校合并組建的新山東大學(xué)等幾個歷史發(fā)展時期。
產(chǎn)品原理:
本試劑盒采用酶譜法(Zymography)檢測MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法,其靈敏度可達1 nM,高于ELISA方法,其基本原理和程序是:制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE 凝膠,含蛋白酶的樣品在此凝膠中進行電泳,電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng)Buffer 孵育,凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶條帶的位置,蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮區(qū)域,從而能同時指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學(xué)反應(yīng)緩沖液,可檢測少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性,檢測靈敏度~1nM。試劑盒可進行50次標準小膠檢測,如果小膠加樣孔為10~15個,則總計可檢測500~750個樣品。
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染色步驟:
1. 此染色液即為工作液,使用時直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養(yǎng)皿中以考馬斯亮藍染色液覆蓋凝
膠,并緩慢搖動2h;
2. 傾去染色液,用脫色液沖洗凝膠;
3. 以脫色液覆蓋凝膠,緩慢搖動2h,傾去脫色液,再加入新脫色液進行脫色,直至獲得清晰的藍色的條帶和干凈的背景(通常此過程需要2~4h,也可脫色過夜至清晰的藍色的條帶和干凈的背景);
4. 對凝膠進行分析和照相,凝膠可放置在7%的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置(P2000)對
凝膠進行處理后保存。
安全性:含有甲醇,無特殊毒性,按一般化學(xué)品操作規(guī)程處理
參考文獻:
1. Nagase H and Woessner JF. Matrix Metalloproteinases. J Biol Chem, 1999, 274, 21491-21494
2. Heussen C, and Dowdle EB. Electrophoretic analysis of plasminogen activators in polyacrylamidegels containing sodium dodecyl sulfate and copolymerized substrates. Anal. Biochem,1980, 102,196–202
3.綠茶多酚EGCG增強動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性及其相關(guān)機制研究
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