EZfusion同源重組酶多功能試劑盒，新鮮出爐
南京信帆生物所提供的 EZfusion Enzyme 專門(mén)為把 PCR 產(chǎn)物快速，定向，有效的克隆到任何目標(biāo)載體而設(shè)計(jì)。有效的避免了在克隆過(guò)程中遇到的合適內(nèi)切酶的選擇，化，補(bǔ)平，加 A，使用中間載體等等一系列復(fù)雜步驟。
無(wú)需連接酶，只需要把目標(biāo)載體線性化(平末端，粘性末端都可以)，PCR 產(chǎn)物無(wú)需任何酶促處理，直接和目標(biāo)載體混合，20 分鐘一站式解決所有問(wèn)題。無(wú)需藍(lán)白班篩選，無(wú)需擔(dān)心克隆方向，無(wú)須擔(dān)心陽(yáng)性克隆比率，隨意挑取克隆，陽(yáng)性率>99%.使用本試劑盒，可以定向克隆 12kb 的片段。
注意：
可以采用任何聚合酶來(lái)得到 PCR 產(chǎn)物，但是，引物和引物二聚體會(huì)對(duì) EZfusion 有一定的抑制作用。如果 PCR 反應(yīng)得到單一的目的條帶，PCR 產(chǎn)物可以用 PCR 純化試劑盒回收；如果 PCR 產(chǎn)生很多非特異性條帶，應(yīng)該用凝膠回收純化目的條帶。
適用范圍：
1. PCR cloning into any vector
2. Long PCR DNA (up to 12kb) cloning
3. Gene transfer one vector to another
4. High-throughput (HTP) PCR cloning
5. In vitro joing of DNA fragments
線性化載體的制備 載體的*線性化對(duì)于重組實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要，沒(méi)有線性化的載體會(huì)產(chǎn)生非常高的背景。 線性化后的載體需要過(guò)柱純化或者凝膠回收純化。
轉(zhuǎn)化 ：
1. 新鮮制備的或-70℃下保存的 100ul 感受態(tài)細(xì)胞，置于冰上，*解凍后輕輕地將細(xì)胞均勻懸浮。
2. 加入 10-12ul 連接液，輕輕混勻，冰上放置 30 分鐘。
3. 42℃水浴 90 秒，冰上放置 2 分鐘。
4. 加 600ul SOC 培養(yǎng)基，37℃ 250rpm 振蕩培養(yǎng)小時(shí)。
5. 室溫下 4000rpm 離心 5 分鐘，用吸頭吸掉 500ul 上清液，用剩余的培養(yǎng)基將細(xì)胞懸浮。
6. 將細(xì)菌均勻細(xì)致得涂布在 90mm 平板上。 注：細(xì)菌的用量依連接的效率及感受態(tài)細(xì)胞的感受率而進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。
7. 平板在 37℃下正向放置 1 小時(shí)后以吸附過(guò)多的液體，然后倒置培養(yǎng)過(guò)夜。
信帆生物對(duì)質(zhì)量的控制涵蓋生物試劑、放行、市場(chǎng)質(zhì)量反饋的全過(guò)程,包括原輔料、包裝材料、工藝用水、中間過(guò)程及成品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和分析方法的建立、取樣、檢驗(yàn)和產(chǎn)品穩(wěn)定性考察和市場(chǎng)不良反饋樣品的復(fù)核等工作,確保產(chǎn)品的精確度、穩(wěn)定性。我們確保銷售給客戶的產(chǎn)品是能夠符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),適合客戶要求的產(chǎn)品。
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