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培養(yǎng)液滅菌的操作流程

培養(yǎng)液在制備過程中帶有各種雜菌，分裝后應(yīng)立即滅菌，或在24小時(shí)內(nèi)完成滅菌工序。目前常用過濾除菌法除去培養(yǎng)物操作液和培養(yǎng)液中的細(xì)菌。或?qū)ε囵B(yǎng)液中耐熱組分行高壓蒸汽滅菌，然后在無菌室加入經(jīng)過過濾除菌的不耐熱溶液，混勻后分裝備用。

使用高壓蒸汽滅菌器滅菌時(shí)，將分裝好的培養(yǎng)液放入底部有一定量(淹沒加熱管)涼水的高壓蒸汽滅菌器內(nèi)，增壓至0.35~0.4kg/cm2時(shí)排凈滅菌器內(nèi)冷空氣，以便使蒸汽能到達(dá)各個(gè)消毒部位，保證消毒滅菌*。然后繼續(xù)加壓加熱，當(dāng)壓力表讀數(shù)達(dá)到1.0~1.1kg/cm2為121ºC，保持15~20 min即可。由于消毒滅菌效果取決于溫度而不是壓力，所以在一定壓力下保持較長的消毒滅菌時(shí)間是必須的。

在121ºC的蒸汽溫度下可以很快殺死各種細(xì)菌及高度耐熱的芽孢桿菌，因此許多培養(yǎng)液的消毒滅菌壓力、溫度一般保持在1.0~1.1 kg/cm2、121ºC。消毒滅菌時(shí)間與需要消毒滅菌的培養(yǎng)液量密切相關(guān)(表2-3)，時(shí)間不足達(dá)不到滅菌效果，時(shí)間過長培養(yǎng)液內(nèi)的一些化學(xué)物質(zhì)遭到破壞，影響培養(yǎng)液成分。消毒滅菌結(jié)束后，關(guān)閉熱源，只有當(dāng)滅菌器內(nèi)壓力降為零時(shí)才能打開放氣閥，排除剩余蒸汽，取出培養(yǎng)液。不可在壓力較高時(shí)打開放氣閥，引起減壓沸騰，使容器中液體溢出。

培養(yǎng)液組成中如含有遇熱易分解的物質(zhì)，則需用過濾方法消毒滅菌。

首先對(duì)培養(yǎng)液中耐熱組分進(jìn)行高壓蒸汽滅菌后放置在無菌場(chǎng)所，固體培養(yǎng)液在40ºC左右瓊脂即將凝結(jié)前，加入經(jīng)過過濾除菌的不耐熱溶液，混勻后冷卻備用。液體培養(yǎng)液在冷卻到室溫后再加入過濾除菌溶液。過濾除菌時(shí)，使用孔徑為0.22～0.45μm或更小的細(xì)菌濾膜。過濾除菌可利用抽濾裝置或注射過濾器進(jìn)行，所用器皿均應(yīng)進(jìn)行高壓消毒滅菌，溫度不應(yīng)超過121ºC。

玻璃器皿、塑料器皿和器械滅菌

玻璃器皿可進(jìn)行干熱滅菌或高壓蒸汽滅菌，但在蒸汽滅菌后需要及時(shí)烘干水分。

對(duì)不能進(jìn)行高壓蒸汽滅菌的塑料器皿可用75%酒精浸泡，使用前在無菌操作臺(tái)面上晾干的同時(shí)，用紫外線重復(fù)殺菌。

實(shí)驗(yàn)室還可以用環(huán)氧乙烷滅菌袋對(duì)塑料器皿進(jìn)行消毒，消毒后的器皿要充分散氣2～4小時(shí)后才可使用。

無菌操作所用的各種器械，一般采用干熱或高壓蒸汽滅菌，或用75%酒精浸泡，然后在無菌操作臺(tái)面上晾干的同時(shí)再用紫外線重復(fù)殺菌;在使用期間可多次對(duì)其進(jìn)行酒精燈火焰灼燒滅菌。

培養(yǎng)材料的消毒滅菌

采自動(dòng)物機(jī)體的實(shí)驗(yàn)材料，攜帶著微生物及雜質(zhì)，接種前須進(jìn)行表面消毒滅菌，對(duì)內(nèi)部已受微生物侵染的材料應(yīng)予以淘汰。

從動(dòng)物機(jī)體采集的某些組織塊，須用消毒劑進(jìn)行浸泡處理，進(jìn)行表面消毒。常用消毒劑有過氧化氫(10~12%，浸泡5~15min)、過氧乙酸(0.05%，浸泡30 s~1min)、酒精(70~75%，浸泡2min)。