細胞活力(活死細胞染色)檢測試劑盒適用于哪些實驗
細胞活力(活死細胞染色)檢測試劑盒(Calcein AM,PI法，適用于FACS、FM) 通過同時檢測細胞內(nèi)酯酶活性和質(zhì)膜完整性，提供一種判斷細胞活力的熒光染色方法。
本試劑盒內(nèi)含有兩種染料：鈣黃綠素-AM (Calcein-AM) 和碘化丙啶 (PI)，Calcein-AM可透過活細胞膜，通過活細胞內(nèi)的酯酶作用由幾乎無熒光的Calcein-AM脫去AM基團生成具有強烈熒光信號的綠色熒光物質(zhì)Calcein（Ex/Em：495nm/515nm），因此活細胞可被檢測到綠色熒光。另一方面PI不能透過活細胞的細胞膜，但當(dāng)細胞膜受損時PI可進入到死細胞內(nèi)并與核酸結(jié)合，產(chǎn)生明亮的紅色熒光（Ex/Em：535nm/617nm），因此死細胞會被檢測到紅色熒光。用490nm激發(fā)時可用熒光顯微鏡同時觀察活細胞和死細胞；而用545nm激發(fā)時僅可觀察到死細胞。
本試劑盒適用于熒光顯微鏡、流式細胞儀、熒光酶標儀等熒光檢測系統(tǒng)。本試劑盒可以應(yīng)用于大多數(shù)的真核哺乳動物細胞，但不適用于細菌和真菌。
產(chǎn)品應(yīng)用實測：
細胞：Hela；
凋亡處理：Apoptosis Activator 2
檢測工作濃度：2 µM calcein AM, 8 µM PI；
孵育時間：40 min；
檢測條件：熒光顯微鏡，200×。
結(jié)果：活細胞細胞質(zhì)成綠色熒光，死細胞細胞核呈紅色熒光，顏色鮮明。
注意事項：
1. 本試劑盒中的Calcein-AM Solution和PI Solution量很少，有可能會粘在蓋子或管壁上，開封前請先適當(dāng)離心至管底。
2. 由于Calcein-AM儲存液對濕度非常敏感，請在每次使用后緊緊密封Calcein-AM儲存液的蓋子。如果不能一次用完，建議根據(jù)單次用量分裝密封保存。例如分裝成10μl/管，用封口膜封口，并用鋁箔紙包裹，放在一個密閉性能好的塑料袋中，并放入一包干燥劑，在-20℃密封避光保存。
3. 染色工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用，配制好的工作液請在當(dāng)天使用。
4. 熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用本試劑盒的過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測。
5. 碘化丙啶對人體有刺激性，操作時請小心，并注意適當(dāng)防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
6. 為了您的安全和健康，操作時請穿著實驗服并佩戴一次性手套。
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