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南京信帆生物:如何選擇免疫膠體金銀細胞化學染色實驗中的固定劑
更新時間:2016-05-08   點擊次數:1101次

要想獲取良好的免疫膠體金銀染色效果,首先取決于標本的處理是否恰當,其次是給高特異性和價的一抗選擇的稀釋度。

由于免疫組化方法廣泛應用于不同的生物學科,所要檢出的抗原種類繁多,性質也各不相同。因此,不可能有一種適用于所有抗原的固定劑,而是根據不同的抗原性質區(qū)別對待。

一、固定劑的選擇及固定時間(詳見表5-9)

(1)Karovsky's 液pH7.3。

(2)PAP液(Periodate—lysine – paraformaldehyde fixative)

表5-9 各種抗原固定劑的選擇及固定時間

待檢抗原固定劑的種類固定時間
蛋白質  
冰凍切片不固定,或用95%乙醇,B5固定液10 min
激素冰凍切片,涂片,印片,不固定或丙酮,甲10 min
醇,乙醇,PEG固定,B5固定液固定430 min
免疫球蛋白中性福爾馬林,(1%甲醛)30 min
白蛋白95%乙醇含1~5%冰醋酸30 min
纖維蛋白元同上30 min
病毒丙酮,乙醇,甲醇,乙醚30 min
糖蛋白PLP,丙酮30 min
脂質Forssman中性福爾馬林20 min
抗原2.5%硫代硫酸鈉,冰凍切片不固定20 min
免疫電鏡PLP,戊二醛,戊二醛—多聚甲醛(Kacnovsky’s 液pH7.3)PEG、ECD-G等30min

二、切片的處理與粘附。

免疫組化染色過程較長,洗的次數很多,而且均在振蕩洗滌,抗原片附貼不緊,往往在zui后的時刻,還沒有等顯色就會脫落導致前功盡棄,這個環(huán)節(jié) 雖小卻會影響大局,因此,為了保證切片染色成功必須把切片處理好,解除掉片的后顧之憂。

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