生物通報(bào)道 Promega公司近日宣布推出NanoBRET™ 蛋白相互作用分析。這種分析利用新的生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）技術(shù)，讓研究人員能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)控活細(xì)胞中的蛋白相互作用。
研究蛋白相互作用的傳統(tǒng)方法通常是在體外開展的，只使用了蛋白片段，無(wú)法在細(xì)胞環(huán)境的背景下提供數(shù)據(jù)。然而，檢測(cè)結(jié)果欠缺在細(xì)胞水平的驗(yàn)證而缺乏說服力，還需要進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢測(cè)來驗(yàn)證。而對(duì)于NanoBRET™ 蛋白相互作用分析，研究人員能夠利用全長(zhǎng)的蛋白質(zhì)，在活細(xì)胞水平研究蛋白相互作用的誘導(dǎo)和抑制。
BRET的原理是：當(dāng)兩個(gè)蛋白分子相互作用，一個(gè)蛋白融合表達(dá)的供體螢光素酶蛋白（傳統(tǒng)使用Renilla 海腎螢光素酶）酶學(xué)反應(yīng)所產(chǎn)生的發(fā)光信號(hào)光譜與另一個(gè)蛋白標(biāo)記的受體熒光基團(tuán)的激發(fā)光譜相重疊，誘發(fā)受體分子發(fā)出熒光。與熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）相比，BRET不需要激發(fā)光，背景更低。
NanoBRET™ 分析是大幅度改良的BRET 分析平臺(tái)，使用NanoLuc® 螢光素酶作為能量供體，而HaloTag蛋白標(biāo)記的NanoBRET™ 618 熒光基團(tuán)作為受體。來自NanoLuc 供體的明亮藍(lán)移發(fā)光信號(hào)耦合到遠(yuǎn)紅移的HaloTag 受體上后，光譜疊加更佳、信號(hào)更強(qiáng)，背景更低。
與傳統(tǒng)的BRET方法相比，NanoBRET™ 分析中作為供體的型NanoLuc® 螢光素酶蛋白光信號(hào)更強(qiáng)，與受體熒光基團(tuán)的波長(zhǎng)配對(duì)更理想。它使用的Flexi載體技術(shù)進(jìn)行克隆，更簡(jiǎn)單省時(shí)。同時(shí)，Promega提供商品化預(yù)構(gòu)建載體，可節(jié)省自行構(gòu)建載體的時(shí)間，應(yīng)用更方便。
Flexi 載體克隆系統(tǒng)是基于兩個(gè)稀有酶切位點(diǎn)的限制性內(nèi)切酶，SgfI和PmeI，這種技術(shù)能夠快速、、高保真性地在不同 Flexi. 載體間轉(zhuǎn)移蛋白編碼區(qū)，而無(wú)需重新測(cè)序。NanoBRET™ PPI Flexi Starter System 提供了以Flexi 載體系統(tǒng)為基礎(chǔ)進(jìn)行蛋白相互檢測(cè)的解決方案，包括載體，檢測(cè)試劑及陽(yáng)性對(duì)照。
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