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南京信帆生物:在活細胞水平監(jiān)控蛋白相互作用
更新時間:2016-05-24   點擊次數(shù):1728次

生物通報道 Promega公司近日宣布推出NanoBRET™ 蛋白相互作用分析。這種分析利用新的生物發(fā)光共振能量轉移(BRET)技術,讓研究人員能夠實時監(jiān)控活細胞中的蛋白相互作用。

研究蛋白相互作用的傳統(tǒng)方法通常是在體外開展的,只使用了蛋白片段,無法在細胞環(huán)境的背景下提供數(shù)據(jù)。然而,檢測結果欠缺在細胞水平的驗證而缺乏說服力,還需要進行細胞學檢測來驗證。而對于NanoBRET™ 蛋白相互作用分析,研究人員能夠利用全長的蛋白質,在活細胞水平研究蛋白相互作用的誘導和抑制。

BRET的原理是:當兩個蛋白分子相互作用,一個蛋白融合表達的供體螢光素酶蛋白(傳統(tǒng)使用Renilla 海腎螢光素酶)酶學反應所產生的發(fā)光信號光譜與另一個蛋白標記的受體熒光基團的激發(fā)光譜相重疊,誘發(fā)受體分子發(fā)出熒光。與熒光共振能量轉移(FRET)相比,BRET不需要激發(fā)光,背景更低。

NanoBRET™ 分析是大幅度改良的BRET 分析平臺,使用NanoLuc® 螢光素酶作為能量供體,而HaloTag蛋白標記的NanoBRET™ 618 熒光基團作為受體。來自NanoLuc 供體的明亮藍移發(fā)光信號耦合到遠紅移的HaloTag 受體上后,光譜疊加更佳、信號更強,背景更低。

與傳統(tǒng)的BRET方法相比,NanoBRET™ 分析中作為供體的型NanoLuc® 螢光素酶蛋白光信號更強,與受體熒光基團的波長配對更理想。它使用的Flexi載體技術進行克隆,更簡單省時。同時,Promega提供商品化預構建載體,可節(jié)省自行構建載體的時間,應用更方便。

Flexi 載體克隆系統(tǒng)是基于兩個稀有酶切位點的限制性內切酶,SgfI和PmeI,這種技術能夠快速、、高保真性地在不同 Flexi. 載體間轉移蛋白編碼區(qū),而無需重新測序。NanoBRET™ PPI Flexi Starter System 提供了以Flexi 載體系統(tǒng)為基礎進行蛋白相互檢測的解決方案,包括載體,檢測試劑及陽性對照。

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