狂犬G蛋白(GP)標記抗體狂犬病主要是通過被狂犬病毒感染的動物的撕咬、抓撓受傷而傳播。在中國,狂犬病的主要傳播來源是被RABV感染的狗和貓等。當(dāng)前,對于狂犬病感染或發(fā)病后的治療方法尚未實現(xiàn),因而及時接種狂犬病疫苗可在很大程度上有效防制狂犬病。目前我國動物用狂犬病疫苗主要是傳統(tǒng)滅活疫苗和弱毒疫苗,弱毒疫苗存在返毒的危險,而滅活疫苗則存在滅活不*的風(fēng)險?；蚬こ虂唵挝灰呙缬捎诓缓袕姸镜母腥拘越M分,所以不必進行滅活措施,是新型疫苗研究的重要發(fā)展方向。G(glycoprotein)蛋白是狂犬病毒的五種組成蛋白之一,由524個氨基酸組成,蛋白分子質(zhì)量約為62KD。G蛋白是狂犬病毒中糖基化的,以及可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生中和抗體的結(jié)構(gòu)蛋白。因此,G蛋白既是狂犬病毒中有效的保護性抗原,同時也是研究基因工程亞單位疫苗的抗原,是狂犬病基因工程亞單位疫苗研究的熱點。本課題研究中,利用狂犬病病毒CTN-1V10株為模板,以生物工程合成的方法合成編碼G蛋白的基因片段G。將該片段插入大腸桿菌pET-28a載體中,構(gòu)建重組質(zhì)粒,構(gòu)建完成后,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)細胞BL21(DE3)表達目的蛋白,SDS-PAGE電泳及Western blot結(jié)果表明,重組蛋白在大腸桿菌系統(tǒng)中實現(xiàn)了大量可溶性表達,在此基礎(chǔ)上,進一步對該蛋白的反應(yīng)原性和免疫原性進行了研究與分析。首先以狂犬病病毒CTN-1V10株(Genebank:AEV43285)為模板,設(shè)計相應(yīng)的特異性引物,以生物工程合成的方法合成編碼G蛋白的基因片段G,片段大小為1884bp。

狂犬G蛋白(GP)標記抗體

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